以人体胎盘提取液皮内反应进行癌症普查的研究

中国预防医科院流行病学徽生物学研究所 张见麟

中国科学院武汉病毒研究所 黄文林

湖北省沙市第一人民医院 黄凤翥

　　1962年松原正香发现人体胎盘与癌組织在生物学方面有相似之处，他以人体胎盘代替癌组织提取了抗原，对病人进行皮试，发现与尚未转移的早期癌的阳性率可高达94,5%。因此，日本全国癌症中心自1972年起已釆用此法进行癌症普查，国内一些单位也进行了某些报道，但至今尚未推广，究其原因，一则病例较少，同时还存在一些技术上难以推广的问题，如其安全性特别是乙肝抗原携带问顥，每次制品效价测定需在健康人身上进行，以及保存期等等。我们研究并解决了这些问题，为推广此法打下了基础，现报告如下。

　　1、材料与方法

　　1.1人体胎盘提取液的制备：取新鲜健康足月顺产第一胎产妇的人体胎盘，毎个胎盘血清事先均以放射免疫方法检査其是否拥带乙肝表面抗原，只有HBsAg阴性者才能采用。将胎盘剪去羊腆及血管，切成小块，边冲洗边挤压，直入3倍量无水乙醇，混勻置40C冰箱过夜。次日用滤纸过滤，滤后沉渣连同滤纸一起置40C冰箱中阴干，剥下称重，加入0.4%的酚，0.9%NaCl蒸馏水，使成3%(W/V)。溶液冰箱过夜后，以玻璃组织研磨器将将其磨碎混匀，滤器除菡，抽滤后澄清液即为胎人体盘提取液。

　　将上述提取液接种于肉汤培养基及髙层固体穿刺培养10天，无苗生长。并取体重18-20g小白鼠10只，一组不注射对照，另一组注入1:8稀释的人体胎盘提取液进行安全试验。观察注后30min、24h、48h、72h直到10天，两组小鼠均无异常反应。

　　1.2效价测定及保存：国内外报吿效价测定方法均为将提取液稀释成不同浓度，然后毎个浓度接种7〜8个健康人，选择皮肤反应大小正好在18-20mm之间的浓度为合适浓度(该浓度即为效价)。但此法较麻烦，不易推广，因此我们改用72型分光光度计，双缩尿法到水中无血色。称重后加入倍量50C蒸馏水，在搅拌器(12000r/min)中搅拌1min，共2次，成勻浆，——20C过夜冻结。次日在40C及室温中融解，补充50C蒸馏水，使成胎盘重量的3倍，搅拌均匀，矫正PH到6.0，置400C水浴，每小时顺时钟方向搅动1次。10h后40C冰箱过夜。取出后以2层纱布过滤，弃去沉渣，用0,1N NaOH将滤液的PH调整到6.4，冰箱过夜，次日以3000r/min离心7-8min，上清40C保存,沉淀加2倍量蒸馏水，用NaOH调PH到6.8，同上离心，弃沉渣，上清调PH到7.2，再置冰箱过夜，同上离心，将上清PH调到8.5。最后离心所得少最沉淀物与保存于冰箱内PH值6.4的上清混合在一起，測量体积，加测定O.D.来代替人休注射测效法，以不同浓度(1:4，1:6，1:8)注入健康人观察反应，并同时测O.D.540值，发现1:6时皮肤反应大小正好为18〜20mm，O.D.为0.06。

　　本试验采用取液保存方法保存效价，要达到0.05O.D.，保存4个月后的原液需1 ：5稀释，而保存7-12个月后則需1：3稀释。

　　1.3皮肤试脍方法：在患者前臂正中1/3掌侧面，经75%酒精消毐后，用结核菌索注射器皮内注射人体胎盘提取液0.2ml，4h后观察反应并记彔。

　　2结果

　　2.1反应安全牲 3年间共观察各种病人及健康人455例，1例因事先没有详细询问皮肤过敏史，在皮内注射剂后72h发生全身过敏，体温轻度升高，经一般脱敏治疗后即痊愈。其余454人均无任何反应。

　　2.2诊断结果

　　2.2.1 对照组(非肿瘤病人及健康人)共160人，其中皮肤反应最大径超过25mm以上的有25人，阳性率为15.6%。25人中病人18人，其中7人为慢性淋巴结炎、淋巴结核，其他为慢性乳 腺增生、肝脓肿等，最长径平均大小为28.6mm。

　　2.2.2 观察I组(未未经抗癌治疗确诊为恶性肿瘤者)共191人，其中包括早期癌症128例，晚期癌症63例。早期癌症4 h皮肤反应超过25mm以上者共107例，阳性率达83.6%。其中早期消化道癌症阳性率高达92.8%(52/56)，其次是早期生死泌尿系统癌症为91.3%(21/23)。晚期癌症阳性率较低，平均阳性率仅39.7%。早晚期合计 平均阳性率为69.6%。

　　2.2.3 观察II组(经抗癌治疗过的病人)共91例，平均阳性率为49.5%。

　　2.2.4 观察III组(未经治疗的良性肿瘤病人)共28例，阳性8人，平均阳性率为30.7%。

　　2.2.5 4组阳性率比较 经统计学检验(X2) ，对照组与观察I组的阳性率有明显差定 为肠癌。临床虽怀疑恶性肿瘤， 但皮试阴性，用其他方法最后否定恶性肿瘤典型病例有9例。在湖北省宜昌地区五峰县鱼关乡宫颈癌病人。其中皮试阳性的7人，可疑反应1人，阴性1人。而非癌妇女24人 中除3人可疑外，无1例阳性反应，符合率较高。

　　确诊为癌症，皮试阳性病 人3例，经地赛 米松3mg脱敏，第2次皮试仍保持阳性。而在非癌病人7例皮试阳性者经脱敏试验，其中5人转为阴性，2人仍保持阳性，2人中1人为过敏体质。通过脱敏试验证明胎盘皮试反应是特异的。

　　关于人体胎盘提取液的保存国内尚无报道。本研究对 40C保存的及稀释液进行了比较，结果证明稀释后保存的人体胎盘提取液，经4个月后效果明显下降(1:4)，保存前O.D.为0.07，4个月后下降为0.03，而1:6稀释液保存前为0.06，4月后下降为0.015。而未经稀释的原液在40C下保存4个月，临用时再稀释，则效价不明显下降。更长时间的保存效果尚待观察。

　　总之，此法简单易行，对早期发现恶性，特别是消化道、生殖道癌症有较高符合率。我们的研究不仅用比其他报告者多10倍 人 异(P<0.001);观察I组与现察II组间阳性率也有明兄差异(P<0.001);对照组与观察III组比较无明显差异。

　　3、讨论

　　用简便方法进行癌症普贤査是早期发现癌症的重要手段，国内虽有少数单位试验过人体胎盘提取液皮内反应，但因安全性差、测效价难、观察例数少(几十例〉等原因未能推广应用。本文共观察455例，未转移早期癌平均阳性率达83.6%，特别是早期消化道癌及泌尿生殖系统癌,阳性率分别达91.3〜92.8%。即使晚期癌症与非肿瘤病人阳性率(15.6%)之间在统计学上也有非常显著差异，临床怀疑恶性肿瘤，皮试阳性，最后用病理学等方法确诊的典型病例有18例，其中笫16例陈X X临床疑似肠癌，但X光不支持，然而皮试阳性，最后用乙状镜确数证实这种方法的可靠性，而且进行了改进，特别对其安全性，人体胎盘血事先用放免测定乙肝抗原，同时以测光密度法代替在人体上测定效价，以及研究了保存时间及方法，这些均有利于本法进一步进行中间试验及大面积推广。

用简便方法进行癌症普贤査是早期发现癌症的重要手段，国内虽有少数单位试验过人体胎盘提取液皮内反应，但因安全性差、测效价难、观察例数少(几十例〉等原因未能推广应用。本文共观察455例，未转移早期癌平均阳性率达83.6%，特别是早期消化道癌及泌尿生殖系统癌,阳性率分别达91.3〜92.8%。即使晚期癌症与非肿瘤病人阳性率(15.6%)之间在统计学上也有非常显著差异，临床怀疑恶性肿瘤，皮试阳性，最后用病理学等方法确诊的典型病例有18例，其中笫16例陈X X临床疑似肠癌，但X光不支持，然而皮试阳性，最后用乙状镜确数证实这种方法的可靠性，而且进行了改进，特别对其安全性，人体胎盘血事先用放免测定乙肝抗原，同时以测光密度法代替在人体上测定效价，以及研究了保存时间及方法，这些均有利于本法进一步进行中间试验及大面积推广。